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生石灰是水产养殖中最常用的消毒剂之一，由于其能与水快速反应，导致温度以及pH值迅速升高，是一种非常有效的消毒剂。但是，由于其腐蚀性极强，因此必须谨慎使用。大量使用生石灰会对水生动植物的生存产生影响。
过氧乙酸（PAA）是另一种常用的消毒剂。由于PAA的高反应活性，在使用后其浓度会迅速下降，尤其是在富含有机物的水中，因此，在计算剂量时必须考虑到水的成分和水温等条件。
为了寻找一种可替代的，环保和有效的消毒剂，本研究测试了一种市售的蛋白酶（Neutrase®）对锦鲤疱疹病毒（KHV）和病毒性出血性败血症病毒（VHSV）的灭活作用。为了进行比较，测试了这些病毒颗粒在不同pH值，不同过氧乙酸和生石灰浓度（通常用于消毒）条件下的稳定性。将病毒悬浮液与各种浓度的不同试剂孵育24小时，并通过病毒滴定确定病毒颗粒的滴度。此外，还检测了固体物质（石英砂）对消毒剂消毒效果的影响。
细胞培养基中KHV和VHSV的稳定性
实验结果显示两种病毒在DMEM培养基中高温条件下的稳定性大大降低。且在相同条件下，VHSV的稳定性高于KHV。
细胞培养基对CaO缓冲能力的测定
实验结果如表1所示，在超纯水中，pH值随溶液中CaO浓度的变化而变化，而在DMEM介质中，由于其较高的缓冲能力，仅在CaO浓度高于10–3 M时才会出现较大的pH值变化。因此，应在CaO浓度低于10–3 M的细胞培养基中进行灭活实验。
悬浮液中病毒颗粒的失活
实验研究了pH、PAA、生石灰和蛋白水解酶Neutrase®在不同温度下孵育24小时对KHV和VHSV感染性的影响。结果如图2a-d所示。
结果显示：当pH值为10.5时，KHV和VHSV的滴定度至少降低了两个数量级。当pH值低至3和4.5或高达12时，均未检测到两种病毒颗粒。
当PAA浓度≤0.01 vol.-%（pH值在6.9-7.3之间）时，两种病毒的滴定度大约降低了两个数量级。
当PAA浓度≥0.1 vol.-% 时，均未检测到两种病毒颗粒。
当CaO浓度低于0.01m时，KHV的滴度没有降低。
当CaO浓度大于0.015m时，均未检测到两种病毒颗粒。
蛋白酶的处理使KHV病毒滴定度从最初的107 mU / ml降低到了104 mU / ml （3个数量级以上）。在蛋白水解活性为1 mU / ml的情况下，已经实现了VHSV的消毒（四个或更多的数量级），而8 mU / ml的Neutrase®已经能将两种病毒的滴度降低到检测极限以下。
总结：
本研究所有实验组都能够将KHV和VHSV的滴度降低到滴定的检测极限以下。尽管有必要进行进一步的研究，但这是蛋白酶用于灭活鱼类病毒的首次报道，证明了蛋白酶具有很大的消毒潜力。
