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海豚链球菌是一种危害较大的水产养殖病原菌，链球菌溶血素s是海豚链球菌的一种重要的致病因子。本研究，作者以牙鲆（比目鱼）为研究对象，构建了一种基于链球菌溶血素s相关基因簇SagH基因的DNA疫苗，结果如下：
一、pSagH疫苗在鱼体表达情况
用pSagH、PCN3或PBS对牙鲆进行了免疫接种。经PCR和RT-PCR检测，pSagH注射鱼的脾、肌肉和肾脏中均检测到质粒DNA和SagH转录物。相比之下，在PCN或PBS接种的鱼类中未检测到SagH转录情况。为了检测SagH蛋白在接种鱼中的表达，作者进行了免疫胶体金电镜分析，结果显示SagH蛋白在接种pSagH的鱼的肌肉组织中产生，而在PCN3的鱼或PBS的鱼中没有产生。
二、pSagH疫苗对头肾巨噬细胞呼吸爆发活性的影响
呼吸爆发活性表明，与PCN3或PBS免疫组相比，pSagH免疫组的巨噬细胞在接种后第4、7和14天呼吸爆发活性显著增强（p<0.05）。
三、免疫鱼血清抗体的产生
用pSagH免疫的鱼血清中含有抗该蛋白的抗体。特异性血清抗体与rSagH2（重组SagH2）在2周时出现，并持续至至少8周。此外，最大血清效价在接种后4周时发生。PCN3和PBS免疫的鱼未检测到特异性血清抗体的产生。
四、pSagH疫苗免疫保护率
接种pSagH的鱼在1～2个月后，用海豚链球菌SF1或29177对其进行感染，并监测15天的死亡率。当在接种后一个月用海豚链球菌SF1感染时，接种pSagH、PCN3和PBS的鱼平均累积死亡率分别为6.0%、76.0%和82.0%。当在接种后两个月用海豚链球菌SF1感染时，接种pSagH、PCN3和PBS的鱼平均累积死亡率分别为8.0%、80.0%和86.0%。在接种一个月后和两个月后，pSagH免疫鱼的相对存活率分别为92.62%和90.58%。为了检验对海豚链球菌29177的交叉保护作用，在接种一个月后用海豚链球菌29177攻击接种过的鱼，结果表明，pSagH、PCN3和PBS接种过的鱼平均累积死亡率分别为12.0%、66.0%和70.0%。在2个月时，接种pSagH、PCN3和PBS的鱼平均累积死亡率分别为14.0%、68.0%和72.0%。因此，在接种1个月和2个月后，接种的用海豚链球菌29177感染接种过pSagH的鱼的相对存活率分别为83.01%和80.65%。
五、免疫基因在鱼体内的表达
采用qRT-PCR方法检测pSagH诱导的免疫相关基因的表达。与接种PCN3相比，接种pSagH疫苗鱼体白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素8（IL-8）、白细胞介素10（IL-10）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、干扰素γ（IFN-γ），干扰素诱导的Mx蛋白（Mx）、NK细胞增强因子（NKEF）、转化生长因子β（TGFβ）、补体C3、免疫球蛋白M（IgM）、D（IgD）和T（IgT）、组织相容性复合物（MHC）Ⅰ类α和Ⅱ类α、CD40和CD8α显著（p<0.01或p<0.05）上调。
小结：
用免疫组化方法检测pSagH(DNA疫苗)免疫后鱼组织中SagH的转录和蛋白表达情况。后期的免疫保护作用表明，1个月和2个月接种DNA疫苗的鱼对i型链球菌的相对存活率分别为92.62%和90.58%。此外，接种DNA疫苗后对Ⅱ型链球菌有很强的交叉保护作用，1个月和2个月后的相对存活率分别为83.01%和80.65%。与对照组相比，接种DNA疫苗后的鱼能诱导更强的呼吸爆发活动，特异性抗体效价更高。qPCR结果表明，一些可能参与先天性和适应性免疫应答的免疫基因的表达上调。这些结果表明，pSagH是一种可用于水产养殖中抗牙鲆i型和ii型链球菌感染的候选DNA疫苗。
